РАЗРАБОТКА РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА КАПСИДА ВИРУСА ГЕПАТИТА Е ТРЕТЬЕГО ГЕНОТИПА: КЛОНИРОВАНИЕ, ЭКСПРЕССИЯ, ОЧИСТКА, ОЦЕНКА АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ

Алаторцева Г.И.^[1], Сидоров А.В.^[1], Нестеренко Л.Н.^[1], Лухверчик Л.Н.^[1], Доценко В.В.^[1], Амшнтова И.И.^[1], Жукина М.В.^[1], Кабаргина В.Ю.^[1], Мылованова А.В.^[1], Воробьев Д.С.^[1], Аммур Ю.И.^[1], Михайлов М.И.^[2], Кюрегян К.К.^[2], Малинникова Е.Ю.^[2], Жаворонок С.В.^[3], Блинов В.М.^[1], Зверев В.В.^[4]

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии

Т. 96, № 1, С. 10-17

Опубликовано: 23 2019

Тип ресурса: Статья

DOI:10.36233/0372-9311-2019-1-10-17

Аннотация:

[strong]Цель.[/strong] Разработка рекомбинантного аналога капсидного белка вируса гепатита Е (ВГЕ) 3 генотипа и исследование его антигенных свойств. [strong]Материалы и методы[/strong]. Штаммы E.coli, плазмидные векторы, серологический и клинический материал, иммуноферментные тест-системы. Молекулярно-биологические, биоинформационные, биотехнологические, биохимические и серологические методы. [strong]Результаты[/strong]. С использованием вирусосодержащего материала от свиней из Белгородской области РФ получен рекомбинантный штамм E.coli — продуцент С-концевого фрагмента белка ORF2 в составе слитного с β-галактозидазой полипептида. Рекомбинантный белок выделен из телец-включений биомассы штамма-продуцента и очищен c помощью эксклюзионной хроматографии. Антигенная специфичность полученного рекомбинантного полипептида подтверждена в иммунохимических реакциях (ИФА, Вестерн-блоттинг) с образцами сывороток крови больных гепатитом Е и контрольных групп пациентов (здоровых доноров, больных гепатитами A, B, C, инфекционным мононуклеозом, цитомегаловирусной инфекцией и ВИЧ-инфицированных).[strong] Заключение[/strong]. Разработан рекомбинантный антиген ORF2 ВГЕ 3 генотипа и показана возможность его применения в диагностических тестах.

Aim. The development of the hepatitis E virus (HEV) genotype 3 recombinant capsid protein. Materials and methods. E.coli strains, plasmid vectors, serological and clinical samples, ELISA reagent kits, molecular biological, bioinformatic, biotechnological, biochemical and serological methods. Results. Using viruscontaining material from pigs of Belgorod region (Russian Federation) we made E.coli strains producing recombinant capsid protein, containing C-terminal of viral ORF2 protein fragment fused to E.coli β-galactosidase. Recombinant protein ORF2 had been isolated from the bacterial inclusion bodies and purified by size exclusion chromatography. Antigenic specificity of the recombinant polypeptide was confirmed by ELISA and Western blotting with sera of hepatitis E patients and reference groups (healthy donors, patients with hepatitis A, B, C, infectious mononucleosis, cytomegalovirus infection and HIV-infected patients). Conclusion. HEV genotype 3 ORF2 recombinant antigen had been developed, and the possibility to use it in diagnostic tests had been experimentally shown.

^[1]НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

^[2]НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Российская медицинская академия последипломного образования

^[3]Белорусский государственный медицинский университет

^[4]НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Первый московский государственный медицинский университет им. И.М.Сеченова

Язык текста: Русский

ISSN: 0372-9311

Алаторцева Г.И. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Сидоров А.В. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Нестеренко Л.Н. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Лухверчик Л.Н. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Доценко В.В. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Амшнтова И.И. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Жукина М.В. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Кабаргина В.Ю. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Мылованова А.В. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Воробьев Д.С. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Аммур Ю.И. Юлия Игоревна НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Михайлов М.И. НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Российская медицинская академия последипломного образования

Кюрегян К.К. НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Российская медицинская академия последипломного образования

Малинникова Е.Ю. НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Российская медицинская академия последипломного образования

Жаворонок С.В. Белорусский государственный медицинский университет

Блинов В.М. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова; I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

Зверев В.В. НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Первый московский государственный медицинский университет им. И.М.Сеченова

НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова

I.I.Mechnikov Federal Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Academy of Science

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Российская медицинская академия последипломного образования

Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Medical Academy of Postgraduate Education

Белорусский государственный медицинский университет

НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Первый московский государственный медицинский университет им. И.М.Сеченова

Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Sechenov First Moscow State Medical University

Alatortseva G.I.

Sidorov A.V.

Nesterenko L.N.

Luhverchik L.N. L. N,

Dotsenko V.V.

Amiantova I.I.

Zhukina M.V.

Kabargina V.Y. V. Yu.

Milovanova A.V.

Vorobev D.S.

Ammur Y.I. Yulia I.

Mikhailov M.I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Medical Academy of Postgraduate Education

Kyuregyan K.K. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Medical Academy of Postgraduate Education

Malinnikova E.Y. E. Yu. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Russian Medical Academy of Postgraduate Education

Zhavoronok S.V.

Blinov V.M.

Zverev V.V. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Sechenov First Moscow State Medical University

DEVELOPMENT OF HEPATITIS E 3 GENOTYPE RECOMBINANT PROTEIN CAPSID OF: CLONING, EXPRESSION, PURIFICATION, EVALUATION OF THE ANTIGENIC PROPERTIES eng

РАЗРАБОТКА РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА КАПСИДА ВИРУСА ГЕПАТИТА Е ТРЕТЬЕГО ГЕНОТИПА: КЛОНИРОВАНИЕ, ЭКСПРЕССИЯ, ОЧИСТКА, ОЦЕНКА АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ

Текст визуальный электронный

Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии

Central Research Institute for Epidemiology

Т. 96, № 1 С. 10-17

2019

вирус гепатита Е 3 генотипа

HEV genotype 3

ген orf2

orf2 gene

капсидный белок

capsid protein

рекомбинантный антиген ORF2

recombinant ORF3 antigen

иммуноферментный анализ

ELISA

Вестерн-блоттинг

Western blot

Статья

[strong]Цель.[/strong] Разработка рекомбинантного аналога капсидного белка вируса гепатита Е (ВГЕ) 3 генотипа и исследование его антигенных свойств. [strong]Материалы и методы[/strong]. Штаммы E.coli, плазмидные векторы, серологический и клинический материал, иммуноферментные тест-системы. Молекулярно-биологические, биоинформационные, биотехнологические, биохимические и серологические методы. [strong]Результаты[/strong]. С использованием вирусосодержащего материала от свиней из Белгородской области РФ получен рекомбинантный штамм E.coli — продуцент С-концевого фрагмента белка ORF2 в составе слитного с β-галактозидазой полипептида. Рекомбинантный белок выделен из телец-включений биомассы штамма-продуцента и очищен c помощью эксклюзионной хроматографии. Антигенная специфичность полученного рекомбинантного полипептида подтверждена в иммунохимических реакциях (ИФА, Вестерн-блоттинг) с образцами сывороток крови больных гепатитом Е и контрольных групп пациентов (здоровых доноров, больных гепатитами A, B, C, инфекционным мононуклеозом, цитомегаловирусной инфекцией и ВИЧ-инфицированных).[strong] Заключение[/strong]. Разработан рекомбинантный антиген ORF2 ВГЕ 3 генотипа и показана возможность его применения в диагностических тестах.

Aim. The development of the hepatitis E virus (HEV) genotype 3 recombinant capsid protein. Materials and methods. E.coli strains, plasmid vectors, serological and clinical samples, ELISA reagent kits, molecular biological, bioinformatic, biotechnological, biochemical and serological methods. Results. Using viruscontaining material from pigs of Belgorod region (Russian Federation) we made E.coli strains producing recombinant capsid protein, containing C-terminal of viral ORF2 protein fragment fused to E.coli β-galactosidase. Recombinant protein ORF2 had been isolated from the bacterial inclusion bodies and purified by size exclusion chromatography. Antigenic specificity of the recombinant polypeptide was confirmed by ELISA and Western blotting with sera of hepatitis E patients and reference groups (healthy donors, patients with hepatitis A, B, C, infectious mononucleosis, cytomegalovirus infection and HIV-infected patients). Conclusion. HEV genotype 3 ORF2 recombinant antigen had been developed, and the possibility to use it in diagnostic tests had been experimentally shown.