Аннотация:
Проведена разработка и валидация двух методик количественного определения коэнзима Q10 (CoQ10) в плазме крови: при помощи ВЭЖХ-УФ и ВЭЖХ-МС/МС. С помощью разработанной методики ВЭЖХ-МС/МС изучена зависимость концентрации CoQ10 в плазме от терапии комбинацией препаратов. Показано, что наиболее чувствительной и воспроизводимой методикой является ВЭЖХ-МС/МС (нижний предел количественного определения (НПКО) составил 0,10 мкг/мл). Одношаговая пробоподготовка осаждением белков, применяемая в методике ВЭЖХ-МС/МС, оказалась более удобной, чем в ВЭЖХ-УФ. Установлено, что НПКО убихинона в методике ВЭЖХ-УФ составил 0,5 мкг/мл. При помощи методики ВЭЖХ-МС/МС была проанализирована средняя концентрация эндогенного CoQ10 у пациентов с сердечно-сосудистыми патологиями, принимающих препараты статинов, p-блокаторов и блокаторов кальциевых каналов, составившая 0,39 мкг/мл. Сделан вывод о непригодности методики ВЭЖХ-УФ для применения в рутинной практике из-за недостаточного НПКО и, как следствие, низкой чувствительности, в то время как методика ВЭЖХ-МС/МС оказалась селективной, чувствительной, быстрой и удобной для внедрения в рутинную практику.
Background. Coenzyme Q10 is a biologically active compound that performs many important functions in the body: electron transfer in the mitochondrial cascade of adenosine triphosphate synthesis, antioxidant, preventing lipid peroxidation. Study Objective. The aim is to develop and compare methods for the quantitative determination of coenzyme Q10 in order to identify the most sensitive, simple and reproducible one. Materials and methods. Coenzyme Q10 was determined using high performance liquid chromatography with spectrophotomet-ric and mass spectrometric detectors. In developing the HPLC-MS / MS it was used the electrospray ionization (ESI) in positive mode. Detection was carried out in the mode of monitoring multiple reactions (MRM). Results. The study developed and validated two methods for the determination of coenzyme Q10 in plasma. It was shown that the most sensitive and reproducible technique was HPLC-MS / MS (the LLOQ constituted 0.10 μg / ml). One-step sample preparation involving proteins precipitation, used in the HPLC-MS / MS method was more convenient than in HPLC-UV one. The LLOQ of ubiquinone in the HPLC-UV method was 0.5 μg / ml. Using the HPLC-MS / MS technique, we analyzed the average concentration of endogenous CoQ10 in patients with cardiovascular pathologies administrating statins, p-blockers and calcium channel blockers, which constituted 0.39 μg / ml. Conclusion. It was concluded that the HPLC-UV method is unsuitable for routine practice use due to the high LLOQ (0.5 μg / ml) and its low sensitivity. While the of HPLC-MS / MS method was selective, sensitive, fast and convenient for introduction into routine practice. Зозина В.И. Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)
Мельников Е.С. Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)
Красных Л.М. «НЦЭСМП» Минздрава России
Горошко О.А. «НЦЭСМП» Минздрава России
Кукес В.Г. Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)
Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)
Sechenov University
«НЦЭСМП» Минздрава России
FSBI «Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation
Zozina V.I. Sechenov University
Melnikov E.S. Sechenov University
Krasnykh L.M. FSBI «Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation
Goroshko O.A. FSBI «Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation
Kukes V.G. Sechenov University
The comparison of methods for the quantitative determination of coenzyme Q10 eng
Сравнение методик количественного определения коэнзима Q10 в плазме крови
Текст визуальный электронный
Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии
Russkiy Vrach Publishing House
Т. 22, № 5 С. 10-14
2019
ВЭЖХ-МС/МС
HPLC-MS/MS
CoQ
C0Q
убихинон
убихинон
ubiquinone
ubiquinone
ВЭЖХ-УФ
ВЭЖХ-УФ
HPLC-UV
HPLC-UV
высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-детектированием
HPLC-MS/MS
Статья
Проведена разработка и валидация двух методик количественного определения коэнзима Q10 (CoQ10) в плазме крови: при помощи ВЭЖХ-УФ и ВЭЖХ-МС/МС. С помощью разработанной методики ВЭЖХ-МС/МС изучена зависимость концентрации CoQ10 в плазме от терапии комбинацией препаратов. Показано, что наиболее чувствительной и воспроизводимой методикой является ВЭЖХ-МС/МС (нижний предел количественного определения (НПКО) составил 0,10 мкг/мл). Одношаговая пробоподготовка осаждением белков, применяемая в методике ВЭЖХ-МС/МС, оказалась более удобной, чем в ВЭЖХ-УФ. Установлено, что НПКО убихинона в методике ВЭЖХ-УФ составил 0,5 мкг/мл. При помощи методики ВЭЖХ-МС/МС была проанализирована средняя концентрация эндогенного CoQ10 у пациентов с сердечно-сосудистыми патологиями, принимающих препараты статинов, p-блокаторов и блокаторов кальциевых каналов, составившая 0,39 мкг/мл. Сделан вывод о непригодности методики ВЭЖХ-УФ для применения в рутинной практике из-за недостаточного НПКО и, как следствие, низкой чувствительности, в то время как методика ВЭЖХ-МС/МС оказалась селективной, чувствительной, быстрой и удобной для внедрения в рутинную практику.
Background. Coenzyme Q10 is a biologically active compound that performs many important functions in the body: electron transfer in the mitochondrial cascade of adenosine triphosphate synthesis, antioxidant, preventing lipid peroxidation. Study Objective. The aim is to develop and compare methods for the quantitative determination of coenzyme Q10 in order to identify the most sensitive, simple and reproducible one. Materials and methods. Coenzyme Q10 was determined using high performance liquid chromatography with spectrophotomet-ric and mass spectrometric detectors. In developing the HPLC-MS / MS it was used the electrospray ionization (ESI) in positive mode. Detection was carried out in the mode of monitoring multiple reactions (MRM). Results. The study developed and validated two methods for the determination of coenzyme Q10 in plasma. It was shown that the most sensitive and reproducible technique was HPLC-MS / MS (the LLOQ constituted 0.10 μg / ml). One-step sample preparation involving proteins precipitation, used in the HPLC-MS / MS method was more convenient than in HPLC-UV one. The LLOQ of ubiquinone in the HPLC-UV method was 0.5 μg / ml. Using the HPLC-MS / MS technique, we analyzed the average concentration of endogenous CoQ10 in patients with cardiovascular pathologies administrating statins, p-blockers and calcium channel blockers, which constituted 0.39 μg / ml. Conclusion. It was concluded that the HPLC-UV method is unsuitable for routine practice use due to the high LLOQ (0.5 μg / ml) and its low sensitivity. While the of HPLC-MS / MS method was selective, sensitive, fast and convenient for introduction into routine practice.