Аннотация:
МЛУ является основным препятствием эффективности химиотерапии. В опухолевых клетках МЛУ может развиваться в ответ на действие даже одного цитостатического агента. Целью настоящей работы была характеристика МЛУ в клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека, полученных в ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. Экспрессию гликопротеина pgpl70 определяли в реакции иммунофлуоресценции, мРНК генов МЛУ определяли методом ОТ-ПЦР, выброс родамина 123 оценивали на проточном цито ф лу о р и метре, цитотоксическую активность определяли в МТТ-тесте. Определение чувствительности клеток к цитотоксическому действию аранозы показало, что клетки меланомы человека mel Ког чувствительны к действию препарата, а клетки mel Ibr и mel MtpX-устойчивы. В реакции иммунофлуоресценции было обнаружено, что от 35 до 50 [%] клеток линии mel Ibr экспрессировали pgpl70. Клетки mel Ког в. mel MtpX не экспрессировали Р-гликопротеин. В ПЦР определяли мРНК генов, ответственных за множественную лекарственную устойчивость - MDR1, BCRP, МЕРІ и LRP (МѴР). Во всех образцах линий клеток мРНК генов BCRP и МЕРІ экспрессируются слабо, а экспрессию мРНК гена LRP (МѴР) не удалось увидеть. мРНК гена YB1 экспрессируется хорошо, что характерно для опухолевых клеток, мРНК этого гена обнаружили в клетках mel MtpX и субклонах линии mel Ibr. Клетки линии mel Ког не содержат мРНК гена MDR1. Исследование выброса родамина 123 (Rhl23) из клеток показало, что контрольные клетки mel Ког накапливали Rhl23 и не выбрасывали его. Клетки линии mel Ibr накапливали Rhl23 и половину выбрасывали. Клетки линии mel MtpX накапливали мало родамина 123 и почти весь выбрасывали. Таким образом, исследование показало, что чувствительные к аранозе клетки линии mel Ког не экспрессируют pgpl70, не содержат мРНК генов МЛУ и не выбрасывают Rhl23. Резистентные к цитотоксическому действию аранозы клетки mel Ibr экспрессируют pgpl70, содержат мРНК гена MDR1, выбрасывают Rhl23. Однако устойчивые к аранозе клетки линии mel MtpX не экспрессируют pgpl70, но содержат мРНК гена MDR1 и активно выбрасывают Rhl23.
MDR is the main obstacle to chemotherapy efficiency. MDR can grow in cancer cells even if only the one cytostatic agent will act. The aim of the nowadays work is to characterize MDR in metastatic human skin melanoma cell lines prepared in “N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center”. pgpl70 expression was detected by immunofluorescence methods. mRNA of MDR gene was identified by Reverse Transcriptase- PCR( RT-PCR) method. Rhodamine 123 (Rhl23) emission has been evaluated by flow cyto- fluorimetiy, cytotoxic activity was estimated by MTT-tests. The cells sensitivity to Aianoza cytostatic effects has showed that mel Kor cells were sensitive to Aranoza acting, but mel Ibr and mel Mtp X were not. Mel Ibr cells had expressed pgpl70 from 35 to 50 per cent, it was detected by immunofluorescence reaction. Mel Kor and mel Mtp-X cells were not expressed P-glycoprotein. mRNA of genes responsible for multi-drug resistance - MDR1, BCRP, MRP1 and LRP (MVP) - were detected by PCR. mRNA of BCRP and MRP1 genes has low expression, barely visible stripes after 33 cycles in all cell lines samples. LRP (MVP) genes expression of mRNA, unfortunately, never managed to see. YB1 gene mRNA expression is well, it is typically for cancer cells. mRNA of gene was found in mel MtpX and mel Ibr subclones cell lines. Mel Kor cells didn't contain mRNA of MDR1 gene. The study of the Rhl23 emission from cells showed that mel Kor control cells had accumulated Rhl23 and didn't throw it out. Mel Ibr cell line accumulated Rhl23 and threw out the half part of it. Mel MtpX cell tine had accumulated the less part of Rhl23 and almost all were thrown out. Thus, the study shows that mel Kor cell tine that are sensitive to Aranoza doesn't express pgpl70, not contain mRNA of multi-chug resistance genes and does not throw Rhl23. Mel Ibr cells resistant to the Aranoza cytotoxic action express pgpl70 ,contain mRNA of MDR1 gene and throw out Rhl23. However, mel MtpX cell line resistant to Aranoza does not express pgpl70, but contains mRNA of MDR1 gene and actively throws out Rhl23.
Афанасьева Д.А. Дарья Андреевна Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
Барышникова М.А. Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
Заботина Т.Н. Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
Борзунова А.А. Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
Бурова О.С. Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
Рыбалкина Е.Ю. Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
Барышников А.Ю. Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
Кадагидзе З.Г. Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
First Moscow State Medical University
Afanasieva D.A. First Moscow State Medical University
Baryshnikova M.A. First Moscow State Medical University
Zabotina T.N. First Moscow State Medical University
Borunova A.A. First Moscow State Medical University
Burova O.S. First Moscow State Medical University
Rybalkina E.Y. E. Yu. First Moscow State Medical University
Baryshnikov A.Y. A. Yu. First Moscow State Medical University
Kadagidze Z.G. First Moscow State Medical University
CHARACTERISTICS OF MULTIDRUG RESISTANCE IN HUMAN SKIN MELANOMA CELL LINES eng
ХАРАКТЕРИСТИКА МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ В КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЯХ МЕТАСТАТИЧЕСКОЙ МЕЛАНОМЫ КОЖИ
Текст визуальный электронный
Российский биотерапевтический журнал
Т. 14, № 4 С. 39-44
2015
клеточные линии меланомы человека
множественная лекарственная устойчивость
multidrug resistance
липосомы
liposomes
гликопротеин pgp 170
ген MDR1
the human melanoma cell tines
multi-drug resistance
liposomes
Статья
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
МЛУ является основным препятствием эффективности химиотерапии. В опухолевых клетках МЛУ может развиваться в ответ на действие даже одного цитостатического агента. Целью настоящей работы была характеристика МЛУ в клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека, полученных в ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. Экспрессию гликопротеина pgpl70 определяли в реакции иммунофлуоресценции, мРНК генов МЛУ определяли методом ОТ-ПЦР, выброс родамина 123 оценивали на проточном цито ф лу о р и метре, цитотоксическую активность определяли в МТТ-тесте. Определение чувствительности клеток к цитотоксическому действию аранозы показало, что клетки меланомы человека mel Ког чувствительны к действию препарата, а клетки mel Ibr и mel MtpX-устойчивы. В реакции иммунофлуоресценции было обнаружено, что от 35 до 50 [%] клеток линии mel Ibr экспрессировали pgpl70. Клетки mel Ког в. mel MtpX не экспрессировали Р-гликопротеин. В ПЦР определяли мРНК генов, ответственных за множественную лекарственную устойчивость - MDR1, BCRP, МЕРІ и LRP (МѴР). Во всех образцах линий клеток мРНК генов BCRP и МЕРІ экспрессируются слабо, а экспрессию мРНК гена LRP (МѴР) не удалось увидеть. мРНК гена YB1 экспрессируется хорошо, что характерно для опухолевых клеток, мРНК этого гена обнаружили в клетках mel MtpX и субклонах линии mel Ibr. Клетки линии mel Ког не содержат мРНК гена MDR1. Исследование выброса родамина 123 (Rhl23) из клеток показало, что контрольные клетки mel Ког накапливали Rhl23 и не выбрасывали его. Клетки линии mel Ibr накапливали Rhl23 и половину выбрасывали. Клетки линии mel MtpX накапливали мало родамина 123 и почти весь выбрасывали. Таким образом, исследование показало, что чувствительные к аранозе клетки линии mel Ког не экспрессируют pgpl70, не содержат мРНК генов МЛУ и не выбрасывают Rhl23. Резистентные к цитотоксическому действию аранозы клетки mel Ibr экспрессируют pgpl70, содержат мРНК гена MDR1, выбрасывают Rhl23. Однако устойчивые к аранозе клетки линии mel MtpX не экспрессируют pgpl70, но содержат мРНК гена MDR1 и активно выбрасывают Rhl23.
MDR is the main obstacle to chemotherapy efficiency. MDR can grow in cancer cells even if only the one cytostatic agent will act. The aim of the nowadays work is to characterize MDR in metastatic human skin melanoma cell lines prepared in “N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center”. pgpl70 expression was detected by immunofluorescence methods. mRNA of MDR gene was identified by Reverse Transcriptase- PCR( RT-PCR) method. Rhodamine 123 (Rhl23) emission has been evaluated by flow cyto- fluorimetiy, cytotoxic activity was estimated by MTT-tests. The cells sensitivity to Aianoza cytostatic effects has showed that mel Kor cells were sensitive to Aranoza acting, but mel Ibr and mel Mtp X were not. Mel Ibr cells had expressed pgpl70 from 35 to 50 per cent, it was detected by immunofluorescence reaction. Mel Kor and mel Mtp-X cells were not expressed P-glycoprotein. mRNA of genes responsible for multi-drug resistance - MDR1, BCRP, MRP1 and LRP (MVP) - were detected by PCR. mRNA of BCRP and MRP1 genes has low expression, barely visible stripes after 33 cycles in all cell lines samples. LRP (MVP) genes expression of mRNA, unfortunately, never managed to see. YB1 gene mRNA expression is well, it is typically for cancer cells. mRNA of gene was found in mel MtpX and mel Ibr subclones cell lines. Mel Kor cells didn't contain mRNA of MDR1 gene. The study of the Rhl23 emission from cells showed that mel Kor control cells had accumulated Rhl23 and didn't throw it out. Mel Ibr cell line accumulated Rhl23 and threw out the half part of it. Mel MtpX cell tine had accumulated the less part of Rhl23 and almost all were thrown out. Thus, the study shows that mel Kor cell tine that are sensitive to Aranoza doesn't express pgpl70, not contain mRNA of multi-chug resistance genes and does not throw Rhl23. Mel Ibr cells resistant to the Aranoza cytotoxic action express pgpl70 ,contain mRNA of MDR1 gene and throw out Rhl23. However, mel MtpX cell line resistant to Aranoza does not express pgpl70, but contains mRNA of MDR1 gene and actively throws out Rhl23.